Bradford
蛋白质定量试剂盒是根据目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法－考马斯亮蓝
G-250（Coomassie
brilliant
blue
G-250）法研制而成，实现了蛋白浓度测定的快速、稳定和高灵敏度。其原理是考马斯亮蓝
G-250
在酸性条件下和蛋白质结合，使得染料最大吸收峰从
465nm
变为595nm，在一定的线性范围内，反应液
595nm
处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定
595nm
处吸光度的增加即可进行蛋白定量。本试剂盒含配制好的考马斯亮蓝染液和牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准溶液，测定范围为
50
g-1000g/ml。测定：另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
注意事项：
1、 如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收，因为这段时间内颜色是最稳定的。
2、 若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。
扩展资料：
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
百度百科-蛋白质测定
是的，先用OD和蛋白质浓度在EXCEL做标准曲线。OD值为X轴，蛋白质浓度为Y，生成曲线，从曲线里得出方程。然后将未知蛋白的OD值代入方程，就能求出未知蛋白的蛋白质浓度。
测的吸光值不要太大和太小。否则误差太大。
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。
不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。
双缩脲法和Folin—酚试剂法的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋。取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致。
扩展资料：
双缩脲法：首先利用标准蛋白溶液和双缩脲试剂绘制标准曲线，将待测血清与硫酸钠在待测试管中混合，并用只加入硫酸钠不含血清的试管作为对照，将两支试管加入等量的双缩脲试剂，充分混合后于37℃环境中放置10分钟，在540nm波长进行比色，以对照管调零，读取吸光度值，由标准曲线上直接查出蛋白质含量。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。
百度百科-蛋白值测定
Bradford法测定蛋白质浓度
（一）实验原理
双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋
白质溶液测定的方法.
1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法）,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白
质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定
法.
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置（ max）,由465nm变为595n
m,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.
在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比.
Bradford法的突出优点是：
（1）灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1 g.这是因为蛋白质与染料结合后产生
的颜色变化很大,蛋白质－染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的
多.
（2）测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的
大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.
因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.
（3）干扰物质少.如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不
干扰此测定法.
考马斯亮蓝法和BCA法测得的蛋白质含量差别较大，主要是由于这两种方法的原理不同以及检测过程中的因素影响。
考马斯亮蓝法也被称为Bradford检测法，虽然相对其他蛋白质检测法来说，干扰物质较少，但是染料与不同的纯化蛋白质的相互作用有强有弱，因此这也不是一种严格的定量方法。此外，考马斯亮蓝法对各种纯化蛋白质的反应不同，这也可能导致测得的结果存在差异。
BCA法是一种改进的Lowery测定法，这种检测法干扰物质相对较少，但也有其缺点，如反应时间长，而且蛋白质可能发生不可逆的变性。在准确度方面，BCA法相较于考马斯亮蓝法更具优势。
因此，由于这两种方法的原理不同以及检测过程中的因素影响，导致测得的蛋白质含量存在差异。在实验中，要根据裂解液的成分去选择适合的方法，并确定是否会对定量试剂有干扰，从而选择最合适的方法进行检测。
也称考马斯蓝染色法（coomassie blue staining）又称Bradford法，是 Bradford 于 1976 年建立起来的一种蛋白质浓度的测定方法。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
bradford测定蛋白质含量主要的优点有
灵敏度高，其最低蛋白质检测量可达1mg。因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质染料复合物有更高的消光系数
测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。
干扰物质少。如K 、Na 、Mg2 离子、Tris、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
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